| Summary: | A doença de Niemann-Pick tipos A e B (NPD A/B) é uma patologia metabólica hereditária do catabolismo lisossomal dos esfingolípidos causada por mutações no gene SMPD1 que se encontra localizado no cromossoma humano 11p15.4. Este gene codifica a enzima esfingomielinase ácida que catalisa a hidrólise de esfingomielina em ceramida e fosforilcolina. Na doença NPD A/B, a deficiente actividade da esfingomielinase ácida origina a acumulação de esfingomielina em vários tipos de células. Esta doença pode manifestar-se nos primeiros meses de vida e os sintomas principais incluem hepatoesplenomegalia, evidência de envolvimento intersticial pulmonar, atraso do desenvolvimento psico-motor e envolvimento neurológico. No entanto, existem formas clínicas de início mais tardio, com uma evolução mais lenta e sem envolvimento neurológico. Em termos terapêuticos, a suplementação enzimática tem sido investigada encontrando-se actualmente em fase de ensaio clínico. A identificação bioquímica da doença é efectuada através do estudo do nível de actividade enzimática da esfingomielinase ácida em amostras de leucócitos obtidos de sangue total periférico, ou de fibroblastos de pele cultivados, com o substrato natural marcado radioactivamente ou, mais recentemente, com um substrato artificial marcado com um grupo cromogénico. Apesar de tecnicamente mais simples, menos dispendioso e seguro na detecção de mutações com impacto na função catalítica da enzima, o substrato artificial cromogénico não permite detectar mutações específicas que interfiram com o reconhecimento e/ou associação da enzima com o substrato natural (variante pseudo-normal). Apesar de raras, a presença deste tipo de variantes, em homozigotia ou heterozigotia composta, poderá dificultar seriamente o diagnóstico bioquímico da patologia se este for efectuado com substratos sintéticos. No sentido de contribuir para a melhoria da qualidade do diagnóstico bioquímico da NPD A/B, o presente trabalho tem por objectivo a implementação dum ensaio enzimático da esfingomielinase ácida utilizando um substrato sintético fluorogénico. Os resultados obtidos em amostras de leucócitos, fibroblastos e amniócitos sugerem que a inclusão futura deste ensaio fluorimétrico no painel de testes bioquímicos de rastreio pós-natal e pré-natal de Doenças Lisossomais de Sobrecarga permitirá a identificação e a caracterização molecular de doentes com NPD A/B, incluindo os indivíduos afectados com a variante pseudo-normal e, desse modo, contribuirá para um melhor conhecimento sobre a epidemiologia genética da doença na população portuguesa.
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