Estudo por citogenética convencional e FISH de 50 amostras com LLC-B - Rebelo, Sandra Sofia da Silva Ferreira (2011)
A leucemia linfocítica crónica do tipo B (LLC-B) é a forma de leucemia mais comum nos adultos do hemisfério Ocidental e, apesar de afectar sobretudo indivíduos idosos, cerca de um quinto dos pacientes tem menos de 55 anos quando diagnosticada. Esta patologia segue um decurso clínico variável com taxas de sobrevivência que se estendem de meses a décadas. Tem-se verificado uma evolução crescente no conhecimento e compreensão das doenças linfoproliferativas crónicas durante os últimos 30 anos, recorrendo a métodos citogenéticos, moleculares e imunológicos. Até ao final dos anos 70, as alterações cromossómicas eram estudadas por culturas de curta duração in vitro e análise das metafases. Contudo, devido ao baixo índice mitótico espontâneo das células tumorais, não foi possível identificar anomalias associadas à LLC-B através deste método, visto que se obtinham metafases de baixa qualidade e em escassa quantidade. Na década de 80 alguns mitogéneos como TPA, lipopolissacarídeos e pokeweed começaram a ser aplicados para estimulação das células B, permitindo identificar as alterações genéticas recorrentes desta patologia. O presente trabalho teve como objectivo identificar, em cinquenta amostras de sangue periférico com LLC-B diagnosticada, as alterações cromossómicas associadas à doença que estão documentadas na literatura e determinação da existência de novas alterações recorrentes, através da aplicação de técnicas citogenéticas e moleculares (Fluorescence in situ Hybridization (FISH)). Relativamente aos resultados citogenéticos deste trabalho, foi possível estimular o crescimento celular na totalidade das amostras, obtendo-se preparações cromossómicas com tamanho e resolução de bandas desejável para análise e em 66% dos casos foram detectadas anomalias cromossómicas. A delecção do cromossoma 13q14 foi a alteração cromossómica mais frequente, seguida da trissomia do cromossoma 12, e da delecção do locus 17p13. Foram identificadas outras mutações pouco comuns, nomeadamente translocações equilibradas em 8% das amostras e, quando presentes envolviam, normalmente, o cromossoma 14q. Relativamente à delecção dos loci 13q14 e 17p13 e trissomia do cromossoma 12, procedeu-se à sua pesquisa por FISH, permitindo a sua identificação em 54% das amostras. Os resultados citogenéticos foram confirmados pela técnica molecular, e em um caso em concreto, a FISH permitiu a detecção de uma delecção subtil do cromossoma 13q14 imperceptível por métodos clássicos. ABSTRACT: B-cell chronic lymphocytic leukaemia (B-CLL) is the most common form of adult leukaemia in the Western hemisphere and, although it mainly affects the elderly, about one fifth of the patients are less than 55 years old at diagnosis. This pathology follows a variable clinical course with overall survival times ranging from months to decades. Over the past 30 years there has been an increasing evolution in the knowledge and understanding of chronic lymphoproliferative disorders, based on cytogenetic, molecular and immunological methods. Until the late 1970s, chromosome alterations were studied by conventional short-term in vitro cultures and chromosome analysis. Nevertheless, due to the low in vitro mitotic activity of the tumour cells, it was unable to identify genetic abnormalities associated to B-CLL through this method, once it led to poor quantity and quality of metaphase spreads. In the 1980s some mitogens, such as TPA, lipopolysaccharides and pokeweed, began being applied to stimulate B cells so they could proliferate in vitro and led to the identification of recurrent genetic alterations in B-CLL. The present work´s purpose consisted in identifying, in fifty peripheral blood samples diagnosed with B-CLL, the chromosomal alterations documented in literature associated to this disease, and determining the existence of new recurrent alterations through cytogenetic and molecular (Fluorescence in situ Hybridization (FISH)) methods. Relatively to the cytogenetic results within this document, the cellular mitotic activity was induced in every sample, permitting to generate metaphase spreads with suitable size and bands resolution for analysis, and in 66% of the cases chromosomal anomalies were detected. Deletion of chromosome 13q14 was the most frequent chromosomal aberration, followed by trissomy of chromosome 12 and deletion of the locus 17p13. Other unusual mutations were identified, namely balanced translocations in 8% of the cases and, when they were present, they usually involved the chromosome 14q. In what concerns to the deletion of the loci 13q14, 17p13 and trissomy of 12 FISH was performed, allowing their identification in 54% of the samples. The cytogenetic results were confirmed by the molecular technique, and specifically in one case, FISH permitted the detection of a subtle deletion of chromosome 13q14 which was imperceptible by conventional methods.