| Summary: | RESUMO: As doenças cardíacas congênitas (DCC) e os defeitos de lateralidade associados são uma das principais preocupações de saúde e 1,35 milhões de pessoas são diagnosticadas com DCC a cada ano em todo o mundo. A complexidade do desenvolvimento do coração e os obstáculos para investigar os fenótipos da doença tornam difícil identificar as causas subjacentes das DCC. O gene DAND5 é o homólogo humano do Cerl-2 de camundongo que codifica uma proteína envolvida na regulação da via de sinalização Nodal antagonizando a proteína Nodal no nódulo e inibindo a sinalização Nodal na mesoderme da placa lateral direita (RLPM). Em um estudo anterior, uma nova variante não-sinônima c.455G> A da DAND5 heterozigótica foi identificada e vinculada ao risco de doença em dois pacientes com DCC decorrentes de defeitos de lateralidade. Para modelar o fenótipo dos pacientes com a variante c.455G> A, uma linha iPSC humana foi previamente gerada e caracterizada (Cristo et al., 2017). Neste trabalho, caracterizamos uma linha iPSC de controle DAND5 de um doador do sexo masculino sadio (sem a variante) para servir de controle para a linha DAND5 c.455G>A. A caracterização foi baseada na detecção de marcadores de pluripotência a nível de genes e proteínas, e potencial diferencial in vitro. A análise de repetições curtas em tandem (STR) usou para provar a identidade genética das células ERE e das iPSCs reprogramadas. A cariotipagem das iPSCs após ≥ 20 passagens mostrou a estabilidade das iPSCs altamente proliferativas. Além disso, o teste de detecção de Mycoplasma mostrou a esterilidade da cultura de células. Esta linha celular de controlo será comparada com a linhagem celular c.455G> A da variante DAND5, para explorar ainda mais o nosso conhecimento sobre as consequências da variante nos fenótipos dos doentes (modelação da doença) e, mais precisamente, na proliferação de cardiomiócitos (terapia possível).
|
|---|