Caraterização funcional de um sistema de bombas de efluxo na resistência e virulência de Aliarcobacter butzleri - Martins, Inês Margarida Cardoso (2022)
O género Aliarcobacter pertence à família validamente publicadas. Entre elas, a espécie quarto microrganismo Campylobacterlike Arcobacteraceae , Aliarcobacter butzleri com nove espécies é considerada o mais frequentemente encontrado em ganismos amostras de fezes diarreicas humanas, e foi ainda incluída na lista de micror considerados um risco moderado para a saúde humana pela Comissão Internacional de Especificações Microbiológicas de Alimentos. Nos últimos anos, têm sido descritas taxas cada vez mais elevadas de multirresistência a diferentes antimicrobianos em i desta bactéria, sendo o efluxo de compostos através de bombas de efluxo um dos mecanismos solados de resistência considerado como relevante. De facto, i nformação prévia sugere a presença de diversos sistemas putativos de efluxo no genoma deste enteropatóge no emergente, cuja caraterização aponta para um potencial papel nos seus mecanismos de resistência e virulência. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o papel de bombas de efluxo na resistência e virulência de A. butzleri potencial pape , com foco no l de uma bomba de efluxo do tipo ABC. Para tal, neste trabalho começou se por estudar o papel de bombas de efluxo em 24 estirpes de A. butzleride diferentes origens através da avaliação do seu perfil de resistência a antibióticos, desinfetantes, metais e outros antimicrobianos, e da determinação do seu perfil de acumulação de brometo de etídio. Os resultados foram correlacionados, tendo sido demonstrado o papel que as bombas de efluxo têm na resistência de A. butzleri , com foco na resistência a ciprofloxac ina e eritromicina. Seguidamente, e após caraterização in silico do transportador YbhFSR, foi construído um mutante, utilizando uma estirpe naturalmente transformável e com perfil de multirresi s através da inativaç tência reconhecido ( ão do gene responsável pela ligação de ATP, A. butzleri ybhF AB 28/11), , por mutagénese insercional e transformação natural. Após confirmada a construção da estirpe mutante e assegurado que a mutação não modificou o crescimento bacteriano, foi avaliado o perfil de resistência da estirpe nativa e mutante a diferentes agentes antimicrobianos, o que demonstrou que a bomba de efluxo YbhFSR pode ter influência na resistência ao cloreto de benzalcónio, brometo de etídio e cádmio, tendo ainda como potenciais substratos desta bomba de ef luxo a ampicilina, eritromicina, cloranfenicol, acriflavina, cobre, manganês, zinco e sódio. Para além disso, foi ainda avaliada a influência da bomba de efluxo YbhFSR na acumulação intracelular de compostos, nomeadamente de brometo de etídio, através de u m método de fluorescência, cujos resultados obtidos indicaram um aumento da acumulação de brometo de etídio ligeir o por parte da estirpe mutante em comparação à estirpe parental, demonstrando um potencial papel da bomba de efluxo YbhFSR na extrusão de compostos tóxicos de A. butzleri. Por último, avaliou-se o efeito da interrupção do gene ybhF no perfil de virulência de A. butzleri , verificando-se o sistema de efluxo em estudo não tem um papel na motilidade, capacidade de formação de biofilme, suscetibilidade ao stress oxidativo ou capacidade da adesão e invasão em células Caco-2, mas a estirpe mutante apresenta resistência ao soro humano contrariamente à estirpe parental. Em suma, neste trabalho foi demonstrada a relevância das bombas de efluxo na resistência de A. butzleri, tendo sido evidenciado o papel da bomba de efluxo YbhFSR na multirresistência desta espécie, pelo que, ainda que careça de estudos complementares, o presente estudo contribuiu para a compreensão dos mecanismos de resistência e virulência de A. butzleri.