Phage therapy: a new technology for depuration of bivalves - Pereira, Carla Sofia Gomes (2017)
De forma a reduzir a transmissão de agentes patogénicos através do consumo de bivalves, devem ser desenvolvidas novas tecnologias a associar à depuração, tal como a terapia fágica. A eficácia da utilização de fagos para controlar infeções bacterianas tem sido relatada em diversos estudos. No entanto, relativamente à utilização da terapia fágica para inativar bactérias patogénicas durante a depuração de bivalves, existe apenas um estudo preliminar, feito sem circulação de água (contrariamente ao que acontece na depuração industrial). O sucesso da combinação destas duas tecnologias depende da compreensão detalhada da dinâmica sazonal e espacial da comunidade bacteriana total, incluindo bactérias associadas a doenças devido ao consumo de bivalves e indicadores de qualidade microbiológica da água, nas zonas de produção de bivalves. Durante o Verão, a comunidade bacteriana total apresentou uma maior complexidade e aumento da abundância dos principais grupos de bactérias patogénicas, indicando que deste pode ser um período crítico onde a terapia fágica deve ser aplicada. No entanto, devido ao impacto das fontes de poluição antropogénicas e outras fontes de contaminação, a terapia fágica poderá ter que ser aplicada também durante a estação fria. Cinco novos fagos foram isolados e caracterizados para controlar Salmonella Typhimurium (phSE-1, phSE-2 e phSE-5) e Escherichia coli (phT4A e EC2A), a fim de avaliar a sua potencial aplicação durante a depuração de bivalves. Os ensaios in vitro demonstraram que o uso de fagos individuais (phT4A e EC2A), pode ser uma alternativa eficaz para o controlo de E. coli, em particular, quando combinados em cocktail. A depuração num sistema estático com MOI 1 usando os fagos phT4A e EC2A, foi a condição em que se obteve melhores resultados (diminuição ~2.0 log CFU/g) em berbigões artificialmente contaminados. Quando berbigões naturalmente contaminados foram tratados em sistema estático com as suspensões de fagos individuais e cocktails de fagos, foram obtidas reduções semelhantes na concentração de E. coli (diminuição ~0.7 log UFC/g). Quando os berbigões naturalmente contaminados foram depurados com o fago phT4A com circulação de água, a concentração de bactéria foi reduzida mais rapidamente que na ausência de fagos. Os resultados dos ensaios in vitro mostraram igualmente que o controlo de S. Typhimurium com fagos phSE-5 e phSE-2 e o cocktail destes dois fagos foi eficiente. A aplicação do fago phSE-5 e cocktail (phSE-2/phSE-5) inativou eficazmente S. Typhimurium em berbigões contaminados artificialmente (redução de 1.7 UFC/g com o fago phSE-5 e 0.7 log UFC/g com o cocktail phSE-2/phSE-5) e em berbigões naturalmente contaminados (redução de 0.9 log UFC/g para ambos para a suspensão simples e para o cocktail) durante a depuração em sistema estático, especialmente quando são usadas suspensões do fago phSE-5 a uma MOI baixa. Os berbigões artificialmente contaminados também foram mais eficazmente descontaminados durante a depuração com circulação de água na presença do fago phSE-5 que quando foi usada apenas depuração sem adição de fagos (i.e. o processo convencional de depuração). Este é o primeiro trabalho em que foi testado o uso de fagos durante a depuração de berbigões naturalmente contaminados e contaminados artificialmente em sistemas com circulação de água, tal como acontece na depuração industrial de bivalves, provando assim que esta tecnologia poderá ser transposta para a indústria. Os resultados obtidos usando fagos de E. coli e de S. Typhimurium mostraram que a combinação da terapia fágica e depuração melhora a segurança microbiana dos bivalves para consumo humano, melhorando a eficiência de descontaminação. Além disso, esta abordagem também permite reduzir o tempo necessário para a depuração e consequentemente, os custos a ela associados. No entanto, a seleção e caracterização dos fagos e determinação da MOI mais adequado para ser utilizado durante a terapia fágica, é essencial para o sucesso da terapia fágica no controlo de bactérias patogénicas.