Desenvolvimento de bionanoconjugados para a deteção de anticorpos anti-Pneumocystis jirovecii - Pinto, Mafalda Barroso Capela Dias (2016)
A Pneumocistose é uma doença infeciosa causada por Pneumocystis jirovecii, um fungo atípico que apresenta tropismo para os pulmões. É uma doença que afeta grande parte da população mundial, surgindo principalmente em doentes imunodeprimidos, sendo o diagnóstico precoce essencial para uma atuação eficaz contra o desenvolvimento da doença. A produção de antigénios sintéticos associados a métodos de deteção robustos, sensíveis e baratos permitem o desenvolvimento de testes de diagnóstico rápido (TDR) que possibilitam a utilização de espécimes biológicos de fácil obtenção. A presente dissertação teve como objetivo o desenvolvimento de bionanoconjugados robustos, constituídos por nanopartículas de ouro (AuNP) conjugadas com um antigénio sintético recombinante multiepítopo (arsm) específico, que permitirão a criação de um TDR imunocromatográfico em fluxo lateral para a deteção de anticorpos circulantes anti-P. jirovecii no soro de doentes. O antigénio rsm foi obtido através de um sistema de sobreexpressão recombinante em Escherichia coli XJb(DE3) e purificado por cromatografia de afinidade com iões cobre imobilizados. As AuNP foram sintetizadas seguindo o método de redução de sal de Au(III) com citrato de sódio em meio aquoso, levando à formação de uma solução coloidal de AuNP. Os bionanoconjugados foram caracterizados através de espectroscopia de UV-Vis e eletroforese em gel de agarose a 0,3%, permitindo provar a sua formação e determinar a quantidade de antigénio rsm necessária para revestir a superfície das AuNP. Através destes métodos de caracterização, obtiveram-se bionanoconjugados estáveis compostos por AuNP-MUA-BSA-Antigénio, para uma razão molar [BSA-Antigénio]/[AuNP-MUA] de 300 e de [BSA]/[Antigénio] de 0,75, sendo a BSA o agente estabilizante da ligação AuNP-antigénio rsm. Ainda confirmou-se a ligação dos bionanoconjugados a soro policlonal contendo anticorpos anti-antigénio rsm, observando-se para a razão molar [Soro]/[AuNP-MUA-BSA-Antigénio] de 0,3, a interação específica entre ambos e comprovando-se a possibilidade de utilização dos bionanoconjugados no desenvolvimento do TDR para a pneumonia por Pneumocystis jirovecii (PPc).