WNT/ß-catenin and Hedgehog signaling pathways as therapeutic targets in B cell neoplasms - Ferreira, Catarina Domingues (2018)
As neoplasias de células B são caracterizadas por um grupo heterogéneo de doenças que incluem linfomas de células B e doenças de células plasmáticas, entre outras. O mieloma múltiplo (MM) é uma neoplasia maligna originada pela proliferação de células plasmáticas monoclonais que permanece incurável. Esta proliferação de células plasmáticas malignas no microambiente da medula óssea produz proteína monoclonal no sangue ou na urina e está associada a sinais malignos. Representa aproximadamente 1% das doenças neoplásicas e 10% a 15% das neoplasias hematológicas. O linfoma difuso de grandes células B (DLBCL) é a forma mais comum de linfoma não-Hodgkin, representando 31% dos linfomas não-Hodgkin, e sendo fatal se não for tratado. DLBCL é um linfoma agressivo e de crescimento rápido que pode surgir nos gânglios linfáticos ou fora do sistema linfático, no trato gastrointestinal, testículos, tiroide, pele, mama, osso ou cérebro. A ativação inadequada de vias de sinalização embrionárias, como WNT/β-catenina e Hedgehog, vias críticas de autorrenovação das células estaminais e diferenciação das células hematopoiéticas, tem sido implicada nestas neoplasias de células B. Neste sentido, essas vias podem constituir potenciais novos alvos terapêuticos para tratar o MM e o DLBCL. O objetivo principal deste estudo foi avaliar o potencial terapêutico de inibidores das vias WNT/β-catenina e Hedgehog, respetivamente IWR-1 e vismodegib, isolados e em combinação um com o outro, usando linhas celulares de MM e DLBCL. Para avaliar o efeito dos inibidores IWR-1 e vismodegib no MM e no DLBCL foram utilizadas linhas celulares H929 (MM) e FARAGE (DLBCL), submetidas a diferentes concentrações dos inibidores. A atividade metabólica foi avaliada utilizando o ensaio de resazurina, a morte celular por microscopia ótica (coloração de May-Grunwald) e citometria de fluxo (FC) (marcação com anexina V/7-AAD e quantificação de BCL-2 e caspases, proteínas relacionadas com a apoptose). A análise do ciclo celular foi avaliada por FC, utilizando a solução PI/RNAse. Também por FC, foi avaliada a expressão de β-catenina e ERK fosforilado, moléculas relacionadas com as vias de sinalização WNT/β-catenina e HH. Os resultados mostraram que IWR-1 e vismodegib reduziram a atividade metabólica celular de modo dependente do tempo, da linha celular e da concentração, em monoterapia ou em combinação. O IC50 do IWR-1 nas células H929 e Farage foi de 40 μM e 75 μM, respetivamente, enquanto que o IC50 do vismodegib foi de 70 μM para as células H929 e 57 μM para as células Farage, após 24 horas de tratamento. Estes resultados mostram que as células H929 são mais sensíveis ao IWR-1 e, contrariamente, as células Farage são mais sensíveis ao vismodegib. Estes compostos induzem a morte celular predominantemente por apoptose e induzem bloqueio do ciclo celular em G1. Em conclusão, os resultados sugerem que IWR-1 e vismodegib são potenciais novas terapias direcionadas que poderão ser eficientes no tratamento de MM e DLBCL. No entanto, IWR-1 é mais indicado para a terapêutica do MM e o vismodegib para a terapêutica do DLBCL.