Caracterização funcional de um sistema de bombas de efluxo na virulência e resistência de Arcobacter butzleri - Mateus, Cristiana Lopes (2020)
O género Arcobacter foi proposto pela primeira vez em 1991 por Vandamme e, até à data, compreende 29 espécies reconhecidas, incluindo Arcobacter butzleri. Esta espécie é considerada o quarto organismo Campylobacter-like mais frequentemente encontrado em amostras de fezes diarreicas no homem, sendo responsável por causar cólicas abdominais, náusea e diarreia. De facto, foi incluída na lista de microrganismos considerados um sério risco para a saúde humana pela Comissão Internacional de Especificações Microbiológicas de Alimentos. Arcobacter spp. tem demonstrado um aumento da resistência a vários antimicrobianos, que podem estar associados a diversos mecanismos, um dos quais através das bombas de efluxo. As bombas de efluxo são estruturas proteicas que representam importantes elementos pertencentes ao repertório microbiano das bactérias e são consideradas responsáveis pela resistência a muitas substâncias. Em bactérias de Gram-negativo, as bombas de efluxo da família resistance-nodulation-division cell (RND) têm um papel relevante na resistência a múltiplos fármacos. Vários genes que codificam para este tipo de sistema foram identificados no genoma de A. butzleri. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de mutantes para a bomba de efluxo do tipo RND (AreDEF) na resistência e virulência de A. butzleri. Como tal, foram construídos mutantes, usando duas estirpes diferentes de A. butzleri, DQ40A1 e AB28/11, por deleção do gene areE do operão da bomba de efluxo. Em seguida, foram testados os efeitos desta deleção na resistência a antimicrobianos, crescimento, robustez bacteriana, motilidade, hidrofobicidade e sobrevivência sob condições adversas, como stress oxidativo, osmótico, biliar e resistência na presença de clorexidina. Quando comparados os mutantes com as estirpes parentais correspondentes, o mutante AB28/11?areE apresentou um aumento na suscetibilidade a cefalosporinas, aminoglicosídeos, tetraciclina, macrólidos, levofloxacina, colato de sódio e cloreto de benzalcónio; no entanto, este fenótipo não foi observado para o mutante DQ40A1?areE. Não foram observadas diferenças no crescimento bacteriano entre as estirpes parentais e mutantes; contudo, A. butzleri AB28/11?areE apresentou uma redução na robustez quando comparada com a estirpe parental. Ambas os mutantes mostraram alterações no valor da hidrofobicidade, porém apenas AB28/11?areE apresentou uma motilidade diminuída. Além disso, A. butzleri AB28/11?areE exibiu um aumento na suscetibilidade às condições de stress testadas quando comparada com a correspondente estirpe parental, mas A. butzleri DQ40A1?areE mostrou alteração apenas em relação ao stress biliar. No ensaio de sobrevivência à clorexidina, verificou-se uma tendência para o aumento da suscetibilidade para ambos os mutantes em estudo. Em conclusão, este trabalho mostrou um potencial papel da bomba de efluxo AreDEF na resistência e virulência de Arcobacter butzleri, no entanto mais estudos serão necessários.