Purifications strategies for polyclonal antibodies from egg yolk - Bernardo, Sandra Cristina da Silva (2020)
Esta tese de doutoramento prende-se com o desenvolvimento de plataformas de purificação mais eficazes para imunoglobulina Y (IgY), anticorpo presente na gema de ovo, visando a sua possível utilização como biofármaco alternativo. Apesar do anticorpo imunoglobulina G (IgG) ser o biofármaco mais utilizado, este apresenta algumas desvantagens, nomeadamente baixos rendimentos de produção e reatividade cruzada com anticorpos humanos ou outras proteínas. Nas últimas décadas, têm sido realizados esforços de modo a utilizar IgY como uma alternativa terapêutica, uma vez que estes anticorpos podem ser obtidos em maiores quantidades e por métodos menos invasivos. No entanto, o custo de produção de IgY com elevada qualidade, e particularmente para aplicações em larga escala, é extremamente elevado quando comparado com outros agentes terapêuticos, o que se deve principalmente à falta de uma estratégia de purificação rentável e eficaz. Assim, o objetivo principal deste trabalho é superar esta grande limitação associada à purificação de IgY. Neste trabalho foi inicialmente realizada uma análise crítica dos métodos de purificação de IgY descritos na literatura, levando à conclusão que são necessários pelo menos dois passos para purificar este anticorpo da gema de ovo. O primeiro passo envolve a remoção de lipídios e lipoproteínas e recuperação da fração de proteínas solúveis em água (FPSA) que contém o anticorpo alvo, seguido da purificação de IgY a partir da FPSA, num segundo ou mais passos. Com base nesta informação, foram posteriormente avaliados dois tipos de métodos de purificação, nomeadamente sistemas aquosos bifásicos (SAB) e sistemas de partição trifásica (SPT). No primeiro tipo de sistemas, onde o objetivo consiste em extrair seletivamente IgY para uma das fases coexistentes, foram estudados sistemas formados por polímeros e sais e por polímeros e líquidos iónicos. O primeiro conjunto de resultados demonstrou que os SAB apresentam baixa seletividade para IgY, especialmente quando considerando a partição preferencial do anticorpo para uma das fases em detrimento das restantes proteínas da FPSA. Por outro lado, a abordagem de partição trifásica, estudada com SAB formados por dois polímeros e líquidos iónicos como eletrólitos, levou a melhores resultados em termos de pureza de IgY, alcançados pela precipitação seletiva do anticorpo alvo na interface do SAB. Sob condições otimizadas, estes sistemas permitiram recuperar IgY com uma pureza superior a 90%. Finalmente, com base no potencial de mercado de IgY como um anticorpo alternativo é também apresentado um plano de negócios preliminar