Transcriptome analysis of A. molluscorum Av27 following TBT exposure - Rodrigues, Raquel Sofia Mesquita (2018)
O tributilestanho (TBT) é um composto tóxico com efeitos nefastos para o ambiente. Este composto foi utilizado durante vários anos como componente de tintas anti-vegetativas aplicadas nos cascos dos barcos sendo, por isso, reconhecido mundialmente como uma das fontes de contaminação de ambientes aquáticos. Atualmente, o uso destas tintas está proibido em alguns países, verificando-se uma diminuição na concentração de TBT no ambiente. Apesar disso, devido à estabilidade e persistência deste composto (principalmente nos sedimentos), a poluição por TBT continua a ser preocupante. Aeromonas molluscorum Av27 foi isolada no sedimento da Ria de Aveiro, num local contaminado por TBT. Esta bactéria é tolerante a concentrações elevadas de TBT (até 3 mM) e é capaz de degradar o composto nos seus derivados menos tóxicos, DBT e MBT. Com o intuito de conhecer o(s) mecanismo(s) molecular(es) que estão na base destas propriedades, procedeu-se à análise do transcriptoma desta estirpe por pirosequenciação. Para isso, para além da condição controlo (sem TBT), as células foram expostas a 5 e 50 μM de TBT até atingirem o meio da fase exponencial. A validação dos resultados de pirosequenciação foi feita por PCR em tempo real. De uma forma geral, a análise dos transcriptomas de A. molluscorum Av27 revelou a presença de diversos genes sobre-expressos após exposição ao TBT. Os genes que se relacionam com a atividade enzimática e o transporte/ligação de compostos foram aqueles que sofreram maiores alterações a nível de expressão, propondo-se desta forma o seu envolvimento nos mecanismos de resistência e degradação de TBT. Alguns dos genes sobre-expressos identificados codificam para bombas de efluxo e outras proteínas envolvidas na resistência a antibióticos e metais pesados, corroborando a relação entre a resistência a estes compostos e a resistência ao TBT. Para além disso, foi sugerido que proteínas envolvidas na resposta ao stress térmico podem também desempenhar um papel importante na resistência ao TBT. Tendo em conta a análise feita, não foi possível encontrar uma proteína responsável pela degradação do TBT. No entanto, foram detetadas várias proteínas sobre-expressas de função desconhecida. A anotação destas proteínas é de grande importância, uma vez que poderá contribuir para a elucidação do mecanismo de degradação de TBT nesta bactéria. Em estudos anteriores, demonstrou-se que o gene sugE está envolvido no mecanismo de resistência ao TBT em Av27 e que o seu nível de expressão está dependente da fase de crescimento das células. No presente estudo, foi possível confirmar que o gene sugE é sub-expresso na presença de TBT quando as células atingem a sua fase exponencial. Foi ainda possível notar que genes relacionados com a transcrição estão sub-expressos após exposição ao TBT, indicando que este composto afeta a transcrição genética. O estudo detalhado dos genes identificados neste trabalho, potencialmente envolvidos no mecanismo de resistência e/ou degradação do TBT, poderá contribuir para a compreensão destes mecanismos em A. molluscorum Av27, assim como noutros organismos procariotas.