Deteção molecular de agentes transmitidos por ixodídeos em bovinos da raça mertolenga em Portugal e mutações no gene cytb de Theileria annulata associadas a resistência a Buparvaquona - DUTRA, Ana Paula da Luz (2022)
As doenças transmitidas por ixodídeos afetam 80% da população bovina mundial, possuindo um grande impacto na produção pecuária e considerável prejuízo económico em todo o mundo. Espécies de Theileria, Babesia e Anaplasma são agentes transmitidos por ixodídeos, com ampla distribuição particularmente nas regiões tropicais e subtropicais. A raça bovina Mertolenga ocorre em diversas regiões de Portugal em mais de 700 explorações, sendo a sua maioria na região sul, como a região do Alentejo. O Alentejo constitui a zona de maior produção bovina em Portugal Continental com aproximadamente 48% (810 000/1 691 000) da produção nacional. O primeiro objetivo deste estudo foi determinar a prevalência na região do Alentejo em Portugal dos hemoparasitas Babesia bigemina, Theileria orientalis e Theileria annulata e da bactéria Anaplasma marginale, em um total de 423 amostras de bovinos Mertolengos. Para tal, procedeu-se a deteção dos genes ama1, mpsp, tams1 e msp1b, respetivamente, por técnica de diagnóstico molecular PCR. A prevalência global foi de 48,70% (206/423; IC95% 43,97-53,45) com Anaplasma marginale sendo o mais abundante dos agentes com 30,3% (128/423; IC95% 26,1-34,8) e Theileria annulata o mais abundante dos agentes do filo Apicomplexa com 14,4% (61/423; IC95% 11,4-18,1) seguido de Babesia bigemina 13,9% (59/423; IC95% 11,0-17,6). Theileria orientalis surge como o hemoparasita com menor prevalência, com apenas 6,4% (27/423; IC95% 4,4-9,1). Ainda, das 206 amostras positivas 151 (73,30%) apresentaram infeções únicas, 42 (20,39%) infeções duplas e 13 (6,31%) infeções triplas. Este trabalho contribuiu para aumentar a informação disponível sobre a prevalência dos agentes patogénicos Anaplasma marginale, Babesia bigemina, Theileria orientalis e Theileria annulata no território nacional e é pioneiro pelo facto de ser o primeiro a ser realizado em bovinos da raça Mertolenga. Na ausência de alternativas às naftoquinonas, o surgimento de estirpes resistentes representa um perigo significativo para a pecuária em países endémicos com Theileriose Tropical. O surgimento da resistência ao fármaco theilericida amplamente utilizado, a buparvaquona, continua a limitar a eficácia da terapia contra o parasita Theileria annulata. Mutações no gene cytb de Theileria annulata têm sido associadas a esta resistência. Perante tal situação, o segundo objetivo deste estudo consistiu em identificar em 13 amostras positivas para Theileria annulata, provenientes de diferentes explorações do objetivo anterior, mutações que possam estar envolvidas na resistência ao fármaco buparvaquona. O gene cytb foi amplificado por nested-PCR e posteriormente sequenciado e comparado com a estirpe de referência Ankara. O alinhamento das sequências nucleotídicas revelou a presença de mutações específicas nos isolados deste estudo, já descritas por outros autores em estudos anteriores em 9 posições, sendo 4 mutações não sinónimas. Para além disso, 35 novos polimorfismos ainda não descritos na literatura foram encontrados com 15 mutações não sinónimas resultando em alterações aminoacídicas. Os dados obtidos neste estudo sugerem evidências da existência de novas mutações pontuais no gene cytb de Theileria annulata que podem estar associadas à resistência ao tratamento com buparvaquona