Validation of LAP1B as a novel protein phosphatase 1 regulator - Graça, Mariana Santos Moreda (2011)
A proteína fosfatase 1 (PP1) é uma proteína fosfatase específica para a desfosforilação de resíduos de serina e treonina que apresenta elevados níveis de expressão no cérebro. A PP1 participa na regulação de diversos processos celulares através da ligação a outras subunidades proteicas responsáveis pela sua especificidade e actividade. No rastreio de uma biblioteca de cDNA de cérebro humano, pelo método dois híbrido de levedura utilizando as isoformas da PP1 como isco, a proteína 1B associada com a lâmina (LAP1B) foi identificada como uma nova potencial proteína reguladora da PP1. A função da LAP1B não é totalmente conhecida, mas sabe-se que é uma proteína da membrana interna do núcleo que interage com as lâminas nucleares e com a proteína torsinaA, a qual está envolvida na distonia de torção de incidência precoce (DTIP). A LAP1B apresenta três motivos potenciais de ligação à PP1, um motivo SILK (um segundo motivo genérico de ligação à PP1) e diversos locais de fosforilação. Dado isto, a interacção entre a PP1 e a LAP1B foi confirmada por meio de várias técnicas. Por co-transformação em levedura, a interacção entre a LAP1B e as isoformas alfa (α), gama1 (γ1) e gama2 (γ2) da PP1 foi confirmada e, além disso, ficou demonstrado que a LAP1B interage com a PP1γ1 através do domínio de ligação 1 (BM1, REVRF). Este domínio está localizado na porção nucleoplásmica da LAP1B. O ensaio de blot overlay, utilizando a PP1γ1 purificada, permitiu comprovar in vitro a interacção entre a PP1 e a LAP1B através da porção nucleoplásmica da LAP1B. A interacção PP1/LAP1B foi comprovada in vivo por co-imunoprecipitação utilizando anticorpos específicos e por co-localização entre a LAP1B e a PP1γ e a PP1α, a qual foi verificada em estruturas subnucleares ainda não identificadas e em alguns pontos próximos do invólucro nuclear. O papel funcional do complexo PP1/LAP1B não foi determinado, mas pode ser importante na estrutura nuclear durante a mitose. Tendo em conta os elevados níveis de expressão da PP1 no estriado e a relação entre o sistema dopaminérgico dos núcleos basais e a DITC, a existência de um putativo tricomplexo PP1/LAP1B/torsinaA e a hipótese da PP1 e/ou a anormal fosforilação de proteínas ter um papel na DITC merece ser investigada.