Variabilidade gen?tica e fenot?pica de Pseudomonas syringae pv. actinidiae, agente causal do cancro da actin?dea, na regi?o do Entre Douro e Minho - Garcia, Eva Margarida Fernandes (2016)
A bact?ria Pseudomonas syringae pv. actinidiae (Psa), agente causal do cancro bacteriano da actin?dea, ? respons?vel pela doen?a considerada mais grave desta cultura na atualidade, provocando importantes preju?zos nos principais pa?ses produtores de kiwi, incluindo Portugal. Esta doen?a, descrita pela primeira vez no Jap?o em 1984, foi detetada em Portugal em 2010, manifestando elevada agressividade e uma dispers?o muito r?pida, tendo, nos dias de hoje, distribui??o generalizada nas principais regi?es produtoras de kiwi. Este trabalho, realizado em 2013 e 2014, teve por objetivo isolar, identificar e caraterizar isolados de Psa na Regi?o do Entre Douro e Minho (EDM), e conhecer a preval?ncia das popula??es de Psa (Psa1, Psa2, Psa3, Psa4) nesta regi?o. A partir de material vegetal com sintomas da doen?a proveniente de diferentes pomares de Actinidia deliciosa, isolou-se o agente patog?nico e realizou-se a sua identifica??o, caracteriza??o morfol?gica, fenot?pica, molecular e de patogenicidade. A an?lise fenot?pica de 94 caracter?sticas de uma cole??o de isolados portugueses mostrou que a maioria deles se posicionou em dois fena. A maior parte dos isolados ficou inclu?do no fenon 1 juntamente com a estirpe italiana CFBP 7286 (Psa3). A compara??o destes resultados com a identifica??o molecular obtida por PCR (com os primers Psa-F1/PsaR2, de Rees-George e colaboradores (2010)) permitiu identificar as 23 estirpes portuguesas como Pseudomonas syringae pv. actinidiae. Os resultados da an?lise da estrutura gen?tica da popula??o portuguesa de Psa caracterizada, com a utiliza??o da t?cnica de multiplex-PCR utilizando os primers PsaF/PsaR, EuropeF/EuropR, ChinaF/ChinaR e JapanF/JapanR, amplificou os dois fragmentos de ADN esperados de 311 e 733 pb simultaneamente, em 22 estirpes isoladas na regi?o EDM e na estirpe italiana CFBP 7286. Estes resultados indicam que as estirpes portuguesas pertencem ? popula??o Psa3, popula??o mais virulenta de Psa, atualmente respons?vel pelo surto da doen?a na Europa e na Nova Zel?ndia. Apenas para uma estirpe (B65), a caracteriza??o molecular n?o foi conclusiva, indicando os resultados que se poder? tratar de uma estirpe da popula??o Psa4 (P. s. pv. actinidifoliorum pv. nov.). A an?lise do polimorfismo obtido por RFLP e BOX-PCR permitiu confirmar que, com exce??o da estirpe B65, as estirpes portuguesas s?o id?nticas ? popula??o Psa3, pois apresentaram o mesmo perfil gen?tico das estirpes Psa3 italiana e da Nova Zel?ndia inclu?das neste estudo. Contudo registou-se a exist?ncia de variabilidade gen?tica no interior das estirpes da popula??o portuguesa. Estes resultados foram igualmente confirmados pela an?lise dos alinhamentos das sequ?ncias dos genes ompP1 e cts das estirpes portuguesas estudadas, que permitiu observar que existe similaridade entre estas e as estirpes de Psa da popula??o Psa3, cujas sequ?ncias foram obtidas no GenBank (JX297572) e no artigo publicado por Vanneste e colaboradores (2010), respetivamente. Os resultados obtidos neste trabalho permitiram ainda isolar bacteri?fagos naturalmente presentes em pomares de actin?dea do EDM, com a capacidade de provocar lise celular de estirpes de Psa. Estes resultados promissores, s?o importantes do ponto de vista do controlo da doen?a, sendo necess?rio a realiza??o de novos estudos.