Porphyrin derivatives and mRNA alternative splicing induced by photodynamic therapy - Gamelas, Sara Raquel Duarte (2016)
Neste trabalho é descrita a síntese de porfirinas regulares e N-confusas com o objetivo da realização de estudos acerca da sua eficiência como fotossensibilizadores (PSs) em terapia fotodinâmica (PDT) e a influência desta no splicing alternativo do mRNA. Os derivados porfirinicos foram preparados tendo como estrutura base a 5,10,15,20-tetraquis(1-metilpiridinio-4-il)porfirina. Inicialmente irá ser realizada uma breve introdução sobre os macrociclos tetrapirrólicos, nomeadamente sobre porfirinas. Segue-se o capítulo 2 onde há a descrição sintética dos derivados porfirínicos usados neste trabalho. Desta forma, através das condições estabelecidas por Lindsey foram sintetizadas duas porfirinas: 5,10,15,20-tetraquis(4-bromometilfenil)-2-aza-21-carboporfirina e a 5,10,15,20-tetraquis(4-bromometilfenil)porfirina e procedendo-se à sua cationização com piridina que originou os derivados 5,10,15,20-tetraquis(4-(piridinio-1-il-metil)fenil)-2-aza-21-carboporfirina e 5,10,15,20-tetraquis(4-(piridinio-1-il-metil)fenil)porfirina. A formação das porfirinas neutras ocorreu com baixo rendimento, mas a sua cationização foi conseguida com rendimentos acima dos 80%. Neste mesmo capítulo ainda são apresentadas as caracterizações fotofísicas de todos os derivados porfirínicos, nomeadamente fluorescência e geração de oxigénio singleto. As porfirinas regulares foram aquelas que demonstraram bons rendimentos quânticos de fluorescência e capacidade para gerar oxigénio singleto em DMF. No capítulo 3 são descritos todos os estudos biológicos realizados neste trabalho. Inicialmente foram realizados estudos de viabilidade celular em células MCF-7 e HeLa usando o teste com WST-1 e ATPliteTM e como PS de referência a 5,10,15,20-tetraquis(1-metilpiridinio-4-il)porfirina. Foram realizados estudos de concentração (0.1 μM-5.0 μM) e tempo de irradiação (0, 5, 10 e 15 min). A 5,10,15,20-tetraquis(4-(piridinio-1-il-metil)fenil)porfirina revelou ser o melhor PS, tendo sido selecionado um tempo de irradiação de 15 min e uma concentração até 5 μM para o estudos subsequentes. Os estudos de localização subcelular e uptake revelaram que a 5,10,15,20-tetraquis(4-(piridinio-1-il-metil)fenil)porfirina entra nas células mas não se localiza no núcleo como acontece com o controlo positivo. São ainda descritos estudos acerca do tipo de morte celular que as células podem sofrer depois da PDT com estes PSs. Por fim os estudos da influência da terapia fotodinâmica no splicing alternativo mostrou que a 5,10,15,20-tetraquis(4-(piridinio-1-il-metil)fenil)porfirina e a 5,10,15,20-tetraquis(1-metilpiridinio-4-il)porfirina parecem induzir um ligeiro splicing alternativo do mRNA.