Development of multiple reaction monitoring assays for bladder cancer diagnosis from urine samples - Bastos, Paulo André Dias (2019)
O Carcinoma da Bexiga é uma doença maligna com extremas implicações físicas e psicológicas para os pacientes e de elevadas repercussões socioeconómicas. A falta de procedimentos de diagnóstico precoce não-invasivos tem permitido que a sobrevivência destes pacientes tenha permanecido inalterada nos últimos 30 anos. Desta forma, biomarcadores para diagnóstico não-invasivo são urgentemente necessários, e amostras de urina representam o meio mais promissor para alcançar este fim. Contudo, apesar de várias tentativas, ensaios imunológicos realizados em amostras de urina demonstram fraca performance clínica e analítica. Single/Multiple Reaction Monitoring (SRM/MRM) é uma técnica de espectrometria de massa para quantificação exata e absoluta. SRM/MRM representa a alternativa mais promissora para efeitos de quantificação, sendo altamente reprodutível, sensível e robusta. Desta forma, objetivou-se o desenvolvimento de ensaios por SRM/MRM para quantificação de biomarcadores de cancro da bexiga na urina, combinando múltiplos marcadores num classificador unificador. O ensaio MRM desenvolvido demonstrou em exatidão e especificidade equiparável ou superior aos ensaios imunológicos até á data disponível. Combinando SLIT2, PROF1, SPRC e NMP22 num classificador baseado em 4 marcadores resultou em performance clínica comparável (~70% sensibilidade e ~100% especificidade ou ~80% sensibilidade e ~57% especificidade) quando comparado com os ensaios convencionais. Contudo, a quantificação livre de interferências não pode ser assegurada devido a efeitos da matriz. Um método eficiente e reprodutível para remover substâncias contaminantes presentes na urina sem comprometer a deteção dos marcadores em causa é necessária para atenuar os efeitos de matriz.