Ciclo de vesículas sinápticas com conteúdo reduzido em junção neuromuscular. - Debora Lopes da Costa Oliveira (2019)
A captação de neurotransmissores para o interior das vesículas sinápticas (VS) é um processo ativo, direcionado pelo gradiente próton eletroquímico, o qual é a soma de dois componentes: o gradiente de pH (?pH) e o potencial de membrana (??), gerado através da atividade da H+ V-ATPase. Neste trabalho, investigou-se os efeitos de drogas que alteram o preenchimento de VS com acetilcolina no ciclo sináptico. Junções neuromusculares de rã foram expostas à sonda fluorescente FM1-43, que permite uma visualização direta e dinâmica do ciclo sináptico. Este marcador consiste em uma molécula anfipática com uma cauda hidrofóbica que promove a ligação da sonda à membrana do terminal axonal. Após um estímulo despolarizante, a membrana marcada com FM1-43 é internalizada por endocitose compensatória de modo que os aglomerados vesiculares podem ser visualizados por meio de microscopia de fluorescência sob a forma de pontos fluorescentes. Estimulação adicional na ausência de FM1-43 permite acompanhar e mensurar a exocitose. Vesamicol, NH4Cl e metilamina, não interferiram de maneira significativa na marcação dos terminais sinápticos com FM1-43 durante estímulo despolarizante com KCl (60mM). Da mesma forma, a exocitose de VS não foi afetada pelas drogas. Logo, nossos resultados sugerem que VS com conteúdo reduzido de neurotransmissor são endocitadas, recicladas e exocitadas de maneira indistinguível daquelas VS com conteúdo quantal preservado. Os resultados obtidos com esta investigação dinâmica do ciclo sináptico poderão nortear abordagens celulares e moleculares que esclareçam como as drogas estudadas interferem com a maquinaria protéica que regula os passos de exocitose e endocitose de vesículas sinápticas.